您好,歡迎來到上海研謹生物科技有限公司!
13585717991
021-65232515
產(chǎn)品型號: VE2011G
所屬分類:分離液試劑盒
產(chǎn)品時間:2024-08-28
簡要描述:本品用于分離羊血管內(nèi)皮細胞 Store at: RT° C 試劑盒內(nèi)容 試劑:全血及組織稀釋液 100ml試劑:細胞洗滌液 100ml試劑B: 100ml試劑C: 100ml試劑D: 100ml說明書 1份
羊血管內(nèi)皮細胞分離液試劑盒
Store at:::RT 試劑盒規(guī)格
試劑盒內(nèi)容:
全血及組織稀釋液 100ml
細胞洗滌液 100ml
試劑 B 100ml
試劑 C 100ml
試劑 D 100ml
說明書 1 份
羊血管內(nèi)皮細胞分離液試劑盒
1. 適用于人或各種動物本系列產(chǎn)品檢索
2. 相關(guān)試劑及耗材
3. 注意事項
4. 應(yīng)用
5. 產(chǎn)品性能指標
6. 貯藏及保存期限
7. 實驗前準備
8. 使用方法說明及圖例
9. HES-TBD550 使用說明
10. 組織單細胞懸液的制備
11. 生產(chǎn)企業(yè)
12. 參考文獻
1. 適用于人或各種動物本系列產(chǎn)品檢索::::
B.... 耗材
貨號 名稱及規(guī)格 生產(chǎn)廠商 價格
貨號 品牌 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 價格
LZS1086P | TBD | 猴臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1118 | TBD | 豬外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1118P | TBD | 豬臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1102 | TBD | 馬外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1102P | TBD | 馬臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1095 | TBD | 羊外周血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1095P | TBD | 羊臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1080F | TBD | 魚全血中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
LZS1080FP | TBD | 魚臟器組織中性粒細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
NK細胞分離液試劑盒 | ||||
NK2011H | TBD | 人NK細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
NK2011RAT | TBD | 大鼠外周血NK細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
NK2011RATP | TBD | 大鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
NK2011M | TBD | 小鼠外周血NK細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
NK2011MP | TBD | 小鼠臟器組織NK細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
NK2011R | TBD | 兔外周血NK細胞分離液試劑盒 | 4*50ml | 600 |
3516 6 孔細胞培養(yǎng)板 50 塊/箱 Costar 686.00
3513 12 孔細胞培養(yǎng)板 50 塊/箱 Costar 675.00
3524 24 孔細胞培養(yǎng)板 100 塊/箱 Costar 1287.00
3548 48 孔細胞培養(yǎng)板 100 塊/箱 Costar 1542.00
3599 96 孔細胞培養(yǎng)板 100 塊/箱 Costar 1367.00
430168 25CM 細胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 20 個/包 Corning 113.00
430639 25CM 細胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 20 個/包 Corning 132.00
430720 75CM 細胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 5 個/包 Corning 56.00
430641 75CM 細胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 5 個/包 Corning 59.00
430823 150CM 細胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 5 個/包 Corning 102.00
430825 150CM 細胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 5 個/包 Corning 107.00
431079 175CM 細胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 5 個/包 Corning 133.00
431080 175CM 細胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 5 個/包 Corning 139.00
431081 225CM 細胞培養(yǎng)瓶(密封蓋) 5 個/包 Corning 167.00
431082 225CM 細胞培養(yǎng)瓶(透氣蓋) 5 個/包 Corning 176.00
430790 15ml 離心管(含泡沫架) 50 支/包 Corning 92.00
430828 50ml 離心管(含泡沫架) 25 支/包 Corning 55.00
430776 250ml 離心管 102 支/箱 Corning 1176.00
4485 1ml 移液管 50 支/包 Costar 55.00 www.tbdscience.com
4486 2ml 移液管 50 支/包 Costar 63.00
4487 5ml 移液管 50 支/包 Costar 92.00
430659 2ml 凍存管(可立外旋) 50 支/包 Corning 117.00
430663 5ml 凍存管(可立外旋) 50 支/包 Corning 131.00
GP2012 玻璃吸管 10 支/包 TBD 30.00
GT201210 10ml 玻璃離心管 10 支/包 TBD 90.00
GT201250 50ml 玻璃離心管 5 支/包 TBD 120.00
L147 100/200 目不銹鋼濾網(wǎng) TBD 150.00
3. .. 注意事項
A. 本分離液是敏光型的,在運輸和貯藏過程中應(yīng)在 18℃-25℃避光保存,啟封后置 4
℃保存避免微生物污染。另外,本品為真空包裝,未啟封前置于 10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,
影響分離效果。
B. 待分離的樣品要求新鮮,避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在 20℃水浴
箱中復(fù)溫 20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在 20℃±2℃時分離效果,且所有操作
過程一定要在無菌條件下進行。
C. 由于各品牌離心機的性能不同,國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,可能影響
分離效果,用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),調(diào)節(jié)離心的時間,摸索*的分離條件(具體分離條件
各實驗室自定)。
D. 使用無靜電反應(yīng)的離心管,推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。
E. *抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑
體積。
F. 分離過程中所用其他試劑如:羥乙一基淀粉 550、全血及組織稀釋液、細胞洗滌液及
紅細胞裂解液等以我公司產(chǎn)品為*選擇,本公司相關(guān)系列產(chǎn)品無菌、無病毒、無支原體、
低內(nèi)毒素水平且無細胞毒性,所獲得的細胞可保持完好的生物活性和完整的細胞形態(tài)。
4. .. 應(yīng) 用
適用于從人或各種動物血液中分離內(nèi)皮細胞。
5.. . . 產(chǎn)品性能指標
pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg www.tbdscience.com
內(nèi)毒素 ≤0.5...EU/ml
無菌 直接接種培養(yǎng) 14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每 50ml 溶液中含 10μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 20 粒以下,,,,含 25μm 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 以上的不溶性微粒 5 粒以下6.. . . 貯藏及保存期限 貯藏及保存期限18℃-25℃避光保存,有效期兩年。啟封后置 4℃保存,有效期一周。
注::::若保證無微生物污染,啟封后可置 4℃長期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
7. .. 實驗前準備
A. 試劑
內(nèi)皮細胞分離液試劑盒所含試劑、組織勻漿液、胎牛血清
B. 器材
玻璃離心管、玻璃滴管
水平轉(zhuǎn)子離心機、無菌工作臺
8.. . . 使用方法說明及圖例 使用方法說明及圖例
A. 在 10ml 或 15ml 玻璃離心管中依次小心加入 B、C、D 三種液體各 2ml,制成梯度界面(各液面分層一定要清晰);
B.取 1ml新鮮抗凝血與全血及組織稀釋液(Cat#:2010C1119)1:1混合并小心加于D液之液面上;或取組織勻漿單細胞懸液(細胞濃度為2×108-1×109個/ml,具體制備方法參照“二、組織單細胞懸液的制備”)小心加于D液之液面上;
C. 以400g(約1500轉(zhuǎn)/分)離心15分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子); 此時離心管中由上至下細胞分為六層。*層;為血漿層或組織勻漿液層。第二層;;;;為富含內(nèi)皮細胞的 D 液層。。。。第三層;為 C 液層。第四層;為單個核細胞層。第五層;為 B 液層。第六層;為紅細胞層。收集第二層富含內(nèi)皮細胞的 D 液層放入含 4-5ml 細胞洗滌液(Cat#:2010X1118)的試管中,充分混勻后,以 500g(約 1800 轉(zhuǎn)/分)離心 20 分鐘,棄去上清留沉淀細胞重新懸起。重復(fù)洗滌 2 次即得所需內(nèi)皮細胞。 沉淀細胞
注::::A. 提取率約為 80%。
9. HES. . HES-TBD550 使用說明
HES 是從支鏈淀粉衍生出來的,是富含淀粉的復(fù)合物,其生理和化學(xué)特性主要由羥乙一基
取代度即取代級、平均分子量決定。大量實驗表明平均分子量越大對紅細胞的凝集作用越強,
有效提高紅細胞的沉降速度,從而使紅細胞與其它細胞分離。故而,使用 HES-TBD550(羥
乙基淀粉 550)沉淀法是一種高效的細胞分離方法。 間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 是指一群可向成骨細胞、成脂肪細胞、骨髓基質(zhì)細胞、肝臟細胞、心肌細胞和神經(jīng)細胞等多種細胞分化的多潛能組織干細胞,是在細胞治療、基因治療中有效發(fā)揮作用的理想工程細胞。MSCs 不僅存在于骨髓,也可從臍血、外周血中以及脂肪組織、肌肉、胎兒器官、大腦、牙齒中分離。UCB - MSCs 的分離、篩選、增殖、分化與臍血樣本的選擇、培養(yǎng)基的差異以及分離、擴增分化過程中操作技術(shù)等多種因素有關(guān)。目前用于 UCB - MSCs 分離的方法有:貼壁篩選法、密度梯度離心法、流式細胞儀法和免疫磁珠法。流式細胞儀法對細胞損傷較大,免疫磁珠法價格相對較貴且由于抗原抗體反應(yīng)也容易改變細胞原有特性,而 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法常與貼壁篩選法結(jié)合使用,可提高所得 UCB - MSCs 的純度,目前研究多采用此法。國內(nèi)不少學(xué)者采用羥乙一基淀粉沉淀紅細胞,然后再進行離心分離單個核細胞,也取得不錯結(jié)果。實驗證明采用隨機數(shù)字表法,將每份臍血隨機分入兩個不同處理組,從而將臍血樣本的個體差異減小到zui小程度。結(jié)果證實,HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)聯(lián)合密度梯度離心法獲得的有核細胞數(shù)量明顯多于 FICOLL 密度梯度離心法。本實驗采用的羥乙一基淀粉商品名為 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550),克分子滲透壓為 308mosm/L,膠體滲透壓為 68/36 mmHg,可影響紅細胞集聚性沉降率。紅細胞集聚是可遞性橋接結(jié)構(gòu)形成的結(jié)果,由大的 HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)分子處在紅細胞之間聯(lián)接而成。HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)同時還阻礙白細胞和內(nèi)皮細胞的黏附,并使平均血小板容積呈現(xiàn)微弱地降低,從而有輕度抑制血小板集聚的功能。臍血經(jīng) HES-TBD550(羥乙一基淀粉 550)處理后,可使紅細胞沉積至試管底,對其它主要成分包括干細胞無影響。經(jīng)這樣處理后,實驗時間相對較短(平均為 1.5 h),步驟相對較少,細胞污染幾率小,從而使細胞數(shù)損失減少。結(jié)論證明,與相應(yīng)的干細胞分離液聯(lián)合分離使用羥乙一基淀粉沉淀法是一種高效的臍血干細胞分離方法。
10.. . . 組織單細胞懸液的制備 組織單細胞懸液的制備
注::::A.. .. 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法,,,,酶消化法由于各實驗室選取的消化 酶消化法由于各實驗室選取的消化
酶種類各不相同,,,,請各實驗室自行選擇進行試驗 請各實驗室自行選擇進行試驗 請各實驗室自行選擇進行試驗。。。。
B. .. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 B. 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境 全過程及所需試劑要求無菌環(huán)境。。。。
剪碎法::::將組織塊放入平皿后,加入少量組織勻漿液及 20%胎牛血清;用眼科剪將組織剪至勻漿狀,加入 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清;用吸管吸取組織勻漿,用 100 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾到試管內(nèi);離心沉淀 1500轉(zhuǎn)/分×3 min,再用細胞洗滌液清洗 3次,每次以 500rpm短時低速離心除去細胞碎片,以 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾去細胞團塊。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(2~5)×107個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109個/ml 的單細胞懸液備用。 勻漿器法:用眼科剪將組織剪成小塊;放入 70ml 組織研磨器內(nèi),加入 2ml 組織勻漿液及 20% 勻漿器法胎牛血清;緩慢轉(zhuǎn)動研棒,研磨至勻漿;用 5ml 組織勻漿液及 20%胎牛血清沖洗研器;收集細胞懸液,經(jīng) 200 目不銹鋼濾網(wǎng)(另購)過濾;離心沉淀 800rpm×2min ,再用細胞洗滌液洗 3 次,離心沉淀。作細胞計數(shù)并調(diào)整細胞濃度為(2~5)×107個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用 20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為 2×108-1×109 個/ml 的單細胞懸液備用。 細胞計數(shù)方法: 細胞計數(shù)法是用來計數(shù)細胞懸液中細胞數(shù)量的一種方法。一般利用計數(shù)板(血球計數(shù)板)進行。既可用于分離(散)細胞培養(yǎng)接種前計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量,也可用于對培養(yǎng)物的細胞數(shù)量進行計數(shù)。不論計數(shù)的對象如何,均須制備分散的細胞懸液。 計數(shù)與計算過程
1)、在細胞計數(shù)板中央放置計數(shù)的蓋玻片。
2)、用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側(cè)的計數(shù)板凹蹧處流出懸液,至
蓋玻片被液體充滿為止。
3)、置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,
對于細胞團按單個細胞計數(shù)。
4)、按下式計數(shù)細胞懸液的密度:
細胞密度=(4 個大格細胞總數(shù)/4)×104個/ml×稀釋倍數(shù)
公式中乘以 104因為計數(shù)板中每一個大格的體積為:
1.0mm(長)×1.0mm(寬)×0.1mm(高)=0.1mm3而 1ml=1000mm3
細胞計數(shù)要點: 細胞計數(shù)要點:::
A. 進行細胞計數(shù)時,要求懸液中細胞數(shù)目不低于 104個/ml,如果細胞數(shù)目很少要進行離
心再懸浮于少量培養(yǎng)液中;顯微鏡下計數(shù)時,遇到 2 個以上細胞組成的細胞團,應(yīng)按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分; 或細胞數(shù)<200 個/10mm2或>500 個/10 mm2 時,說明稀釋不當,需重新制備細胞懸液。
B. 要求細胞懸液中的細胞分散良好,否則影響計數(shù)準確性。
C. 取樣計數(shù)前,應(yīng)充分混勻細胞懸液,尤其是多次取樣計數(shù)時更要注意每次取樣都要混
勻,以求計數(shù)準確;
D. 數(shù)細胞的原則是只數(shù)完整的細胞,若細胞聚集成團時,只按照一個細胞計算。如果細
胞壓在格線上時,則只計上線,不計下線,只計左線,不計右線。
E. 操作時,注意蓋玻片下不能有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中,否則要重新計數(shù)。
初學(xué)者易犯的錯誤: 初學(xué)者易犯的錯誤:::
A. 計數(shù)前未將待測懸液吹打均勻。
B. 滴入細胞懸液時蓋玻片下出現(xiàn)氣泡。
C. 滴入懸液時的量太多,至使細胞懸液流入旁邊的槽中。
11.. . . 生產(chǎn)企業(yè)
12.. . . 參考文獻
[1] Meier C, Middelanis J, Wasielewski B, et al. Spastic paresis after perinatal
brain damage in rats Is reduced by human cord blood mononuclear cells[J]. Pediatric
Research, 2006,59(2):244-249.
[ 2] Boyle AJ, Schulman SP, Hare JM , et al. Stem cell therapy for cardiac
repair:ready for the next step[J]. Circulation, 2006, 114(4):339-352.
[3] 程范軍,鄒 萍,楊漢東,等.人臍血間充質(zhì)干/ 祖細胞誘導(dǎo)為心肌樣細胞的實驗研究[J].
中華器官移植雜志,2003,24:220-222.
[4]Dennis JE,Charbord P.Origin and differentiation of human and murine stroma
[J].Stem Cells,2002,20(3):205.
[5] Yu JC, Daniel TS, Ching PT, et al. Disparate mesenchyme-lineage tendencies
in mesenchymal stem cells from human bone marrow and Umbilical Cord Blood[J]. Stem
Cells, 2006,24(3) : 679-685.
[6] Compagnoli C, Roberts IAG, Kumar S, et al. Identification of mesenchymal
stem/progenitor cells in human first trimester fetal blood, liver and bone marrow
[J]. Blood, 2001,98:2396-2402.
[7] Miura M, Gronthos S, Zhao M, et al. SHED: stem cells from human exfoliated
deciduous teeth[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2003,100:5807–5812.
[8] 遲作華, 張 洹, 何冬梅, 等. 臍血間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]. 中國實用內(nèi)
科雜志,2006, 26(5):372-375.
[9] 向 靜, 江德鵬, 王昌銘,等. 臍血單個核細胞體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)后神經(jīng)干細胞標志物
mRNA 的表達[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2005 ,30 (3):352-355.
[10] 孫海梅,季鳳清,李榮平,等.不同培養(yǎng)條件下人臍血間充質(zhì)干細胞的差異[J]. ***,
2006, 10( 45 ):51-53.
[11] 朱美玲,伍新堯,陳汝光,等.不同分離方法分離臍血造血細胞效率的比較[J]. 中
國輸血雜志,2002 , 15 (3):179-780.
[12] 鄭德先,吳克復(fù),褚建新.現(xiàn)代實驗血液學(xué)研究方法與技術(shù).北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和
醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1999.
[13] 鄂征.組織培養(yǎng).北京出版社,1995.
[14] 朱立平,陳學(xué)清.免疫學(xué)常用實驗方法.人民軍醫(yī)出版社,2000.
產(chǎn)品價格僅供參考,如有變化敬請諒解!如有疑問請的工作人員!