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RNA純化試劑盒說明書

RNA Cleanup Kit

RNA純化試劑盒

Cat. No.   K0589

保存：室溫

組分說明

                                            Catalog no.             K0589

                                              Kit Size                 20

                                             Buffer RL               20 ml

                                    Buffer RW2（concentrate）          11 ml

                                        RNase-Free Water             10 ml

                                          Spin Column RS               20

                                     Collection Tube（1.5 ml）           20

                                     Collection Tube（2 ml）             20

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

    本試劑盒使用*的離心吸附柱，在高鹽條件下 RNA 與硅基質(zhì)膜高效、專一地結(jié)合，適用于從酶促反應(yīng)及其他多種方法提取的 RNA 溶液中進(jìn)一步純化和濃縮 RNA，并將 RNA 樣品進(jìn)行脫鹽處理，有效回收得到高純度的 RNA。該試劑盒最小可以將 RNA 樣品濃縮至 30-50 µl，回收得到的 RNA 可直接用于微點(diǎn)陣分析和 Real-time PCR 等敏感實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1.  預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：

1）使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。

2）玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí)，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。

3）配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。

4）操作人員戴一次性口罩和手套，實(shí)驗(yàn)過程中要勤換手套。

2.  第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明先在 Buffer RW2 中加入無水乙醇。

3.  Buffer RL 如果產(chǎn)生沉淀，請(qǐng)加熱使其溶解后放置。

4.  所有離心步驟均在室溫下進(jìn)行，且所有操作步驟動(dòng)作要迅速。

自備試劑：無水乙醇（新開封或提取RNA專用）  

操作步驟

 1.  用 RNA-Free Water 調(diào)整樣品至總體積至 100  μl，加入 350 μl Buffer RL，充分混勻。

 2.  加入 250  μl  無水乙醇，混勻。

 3.  將得到的溶液700  μl轉(zhuǎn)移到吸附柱（Spin Column RS）中（吸附柱已裝入收集管 2 ml Collection Tube  中），10,000rpm（~11,500 x g）離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

 4.  向吸附柱中加入500  μl Buffer  RW2（用前檢查已加入無水乙醇）, 10,000 rpm  離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

 5.  重復(fù)步驟4。

 6.  將吸附柱放回收集管中，12,000 rpm離心1分鐘。

 7.  將吸附柱裝入新的RNase-Free 1.5ml收集管中，向吸附膜的中間部位加入30-50  μl RNase-Free Water，室溫放置1分鐘，12,000 rpm離心1分鐘，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。

     注意：  RNase-Free Water最好在70℃預(yù)熱，確保RNA洗脫充分；洗脫體積不應(yīng)小于30 μl，體積過小影響回收率。

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